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2024-05-08

波兰科学家应用诱导性多能干细胞来源的细胞外囊泡在缺血性疾病方面的研究

缺血性疾病，包括缺血性心脏病(IHD)和严重肢体缺血(CLI)，是发达国家人群死亡和发病的主要原因。尽管目前在药物治疗和手术干预的情况下，其预防和治疗仍是现代医学的主要挑战之一，迫切需要新的治疗策略来预防缺血性组织损伤的各种不良反应并恢复受损器官的功能。

波兰克拉科夫的大学的波兰科学家应用诱导性多能干细胞来源的细胞外囊泡在缺血性疾病方面的研究。本研究通过分离三种细胞外囊泡：iPS-miR-126-EVs，iPS-copGFP-EVs和iPS-WT-EVs并且经过高分辨率的纳米流式仪Apogeeflow A60分别对三种EVs进行表征分析，通过在体外和体内实验证明细胞中的ips-miR-126-EVs会增强内皮细胞(ECs)的增殖、迁移和毛细血管形成能力。

研究人员利用ApogeeFlow高分辨率纳米流式仪对分离到的iPS-EVs表面标志物进行定性和定量检测。通过ApogeeFlow A60纳米流式细胞术的表型分析，能够确认在iPS-EVs其典型标记物CD81, CD63, CD9，SSAE4的存在。以未标记的EVs和CD34分别作为空白对照和阴性对照进行圈门，在此基础上使用RNASelect染料对EVs进行染色，RNASelect染料与RNA分子结合，对囊泡进行进一步的圈门和分析(Fig.1-D)。研究发现对照组和过表达mir -126的iPS细胞中分离的EVs含有相似含量的典型外泌体标志物的囊泡，如四跨蛋白CD81、CD63和CD9，其中CD81最含量最丰富。它们还含有相似百分比的表达亲本iPS细胞表面标记物的囊泡SSEA-4，这表明所有iPS-EVs标本中的外泌体含量相似(Fig.1-E)。

Fig.1

Fig.2

内皮细胞的有效迁移能力对其在组织愈合和修复中所需的功能以及新血管形成和成熟的能力至关重要。本研究在EV处理后12小时，观察到iPS-miR- 126-EVs刺激后内皮细胞的迁移活性增强，表现为细胞迁移速度、位移速度和迁移距离显著增加(Fig.2)。

Fig.3

在小鼠实验中尽管严重损伤导致最初的体重和运动能力有所下降，但在实验结束时，特别是经过iPS-miR-126-EVs和iPS-WT-EVs处理组的明显恢复了初始体重和运动能力。红线表示正常肢体和非缺血肢体的值(Fig.3)。

结论：在本研究中，科研工作者验证了由诱导多能干细胞分泌并通过Apogeeflow高分辨率纳米流式仪表征分析的iPS来源的EVs可以在体外和体内调节各种内皮细胞功能并增强其血管生成能力。

英国Apogee超灵敏纳米流式分析仪，专为外泌体微囊泡（EVs）等小颗粒分析优化设计，在EVs样品颗粒大小分析，绝对定量，多标记物同时快速分析工作中广泛应用。截止目前，该设备已累计参与数百篇高质量同行审议文章相关实验分析工作。其出色的灵敏度，稳定性及可靠性已备受业内广泛认可，并将继续为EVs相关基础研究及转化应用提供坚实支持。

Apogee纳米流式除了可用于纳米级别的颗粒（如：细胞外囊泡、外泌体、微生物、病毒颗粒、LNP）等，还可以用于作常规动物细胞检测（如免疫细胞、哺乳类动物细胞、等）。它是一台全面且功能强大的纳米流式分析仪！