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BMG:金标准荧光偏振高通量实时监测泛素化修饰
来源: Admin    更新时间: 2020-09-24    浏览: 46 人次

蛋白质泛素化修饰及其介导的蛋白质降解调控至机体内大量生命活动,其异常调节可导致各种重大疾病,如癌症,神经退行性疾病及自身免疫性疾病等。深入研究蛋白质泛素化调控对于了解重大疾病机制及其治疗具有重要意义。近来,越来越多新药研发工作也开始关注于通过PROTACs分子靶向降解泛素化蛋白进行新药研发。


然而,针对泛素化不同酶活性分析,之前一直没有合适的高通量酶分析方案。传统方案主要是凝胶电泳分析法,耗时长,成本高,通量低。此外,目前在用的一些高通量泛素化检测方法,如ELISA,HTRF和AlphaScreen等,也只是检测泛素化后的底物或者底物蛋白邻居的泛素,仍无法精准分析泛素化介导蛋白质降解的具体过程。


近日,Tyler G.Franklin等研究人员1开发出一种新方案-UbiReal(图1),利用BMG CLARIOstar荧光偏振超灵敏性以及长时间检测超高稳定性,对底物蛋白泛素化修饰整个过程进行精准实时监测。通过荧光标记泛素,可设计出荧光偏振高通量精准实时监测体系,不仅可对泛素化修饰整个过程不同阶段的酶,如泛素激活酶E1,泛素结合酶E2,泛素连接酶E3和去泛素化酶DUBs等进行酶活性和酶特异性超灵敏分析,同时可对单泛素化以及多泛素化等不同泛素化修饰类型进行区分检测。此方案的超灵敏性,高稳定性以及应用简易灵活性,不仅可为泛素化相关酶活性调节分子高通量筛选提供极佳应用方案,也可为蛋白质泛素化相关机制基础研究提供极具应用价值的参考方案。



图1,UbiReal-蛋白质泛素化修饰整个过程,不同阶段荧光偏振法实时监测示意图


荧光染料标记的泛素为示踪物小分子,在溶液中自由旋转较快,被检测到的偏振值小;一旦结合其他不同的酶等大分子形成复合物,其自由旋转速度变慢,被检测到偏振值升高


更多详细资料,请参考:

1,Franklin T G, Pruneda J N. A high-throughput assay for monitoring ubiquitination in real time[J]. Frontiers in Chemistry, 2019, 7.

2,https://www.bmglabtech.com/ubiquitination-monitoring-in-real-time-the-fluorescence-polarization-based-method-ubireal/



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