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Precellys:助力水源细菌污染物的快速定量检测
来源: Admin    更新时间: 2020-01-02    浏览: 85 人次

人类日常接触到的水源,例如海洋、湖泊、河流等,可能已经受到了微生物的污染。欧盟EU和美国环境保护机构EPA都已经将肠球菌Enterococcus spp与大肠杆菌E.coli的含量作为水质检测的指标。本篇应用中,法国Blue DNA Companion公司根据EU和EPA的条例,收集了水源之后,推出了一个总时间小于3小时,多参数检测这两种微生物的方法。这种快速定量检测分析是基于RT-PCR这种针对活细菌的分析方法。其中在细菌裂解中,用到的是法国Bertin公司的高性能研磨器Precellys Evolution,该方法已经被世界著名水务公司Suez Environment苏伊士环境集团认证。

实验材料

GenoSPYD过滤试剂盒(Blue DNA Compaion公司,法国);

Precellys Evolution组织研磨器(Bertin公司,法国);

MagSPYD自动化核酸提取平台(Blue DNA Compaion公司,法国);

MIC PCR仪;

GenoSPYD针对Enterococcus spp与E.coli的q-PCR定量试剂盒。



实验程序

1.微生物样品收集:每个样品被0.45μm的滤膜过滤。之后将滤膜装到GenoSPYD裂解管中,并加入1.5mlGenoSPYD细菌裂解缓冲液;

2.将裂解管放入到Precellys Evolution组织研磨器中,研磨程序为转速6500rpm、3个循环、每个循环研磨45s、循环间歇30s;

3.RNA提取:包含RNA的溶菌产物使用GenoSPYD RNA提取试剂盒进行纯化,可在MagSPYD自动化核酸提取平台进行;

4.在MIC PCR仪上进行qRT-PCR的检测。



实验结果

图1为对Enterococcus spp检测的qRT-PCR放大曲线结果,

表1为水中肠球菌Enterococcus spp与大肠杆菌E.coli的LOQ(定量检测限)和LOD(检测下限)的结果。



结论

GenoSPYD自动化产品解决方法配合Precellys组织研磨器可以在3小时内快速检测和定量活微生物样本中一些特定如大肠杆菌、肠球菌、葡萄球菌、假单胞菌的RNA含量等。此方法的水质检测指标可以达到100CFU,同时也被世界著名水务公司Suez Environment苏伊士环境集团认证。

细菌样本裂解程度直接决定了之后提取RNA的效率,Precellys Evolution研磨仪具备高性能、高效率、安全等特点,同时有专利技术的冷却装置Cryolys Evolution,可使整个研磨过程的温度精准维持在0-10℃,加配无RNA酶的研磨kit,轻松实现稳态RNA的提取,助力水源中细菌污染物的快速定量检测,值得信赖!


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