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InCellis:助力乳腺肿瘤原代细胞的迁移分析
来源: Admin    更新时间: 2019-12-19    浏览: 59 人次



目前研究人员越来越关注污染物作为导致癌症的关键因素,除草剂已经被报道,其可以通过修饰DNA的甲基化来改变人类基因组的表达。此外,草甘膦作为除草剂的一种,已被证实可以通过调控雌激素产生途径来促进人乳腺肿瘤细胞的增殖。本篇应用中使用法国Bertin公司的细胞智能成像系统InCellis研究了草甘膦对乳腺肿瘤细胞的影响。


本篇应用主要比较使用草甘膦诱导的乳腺肿瘤原代细胞和乳腺癌细胞系的迁移实验分析,其中Incellis细胞智能成像系统无需胰蛋白酶消化,无需标记即可完成迁移分析。


实验材料

InCellis细胞智能成像系统(法国Bertin公司);MCF-7、MDA-MB-231乳腺癌细胞系,草甘膦诱导的乳腺肿瘤原代细胞Glypho-iBPCTC;


实验步骤

1.将3x105细胞接种到6孔板里,培养至融合度达到80%-90%,使用10μg/ml丝裂霉素C(Sigma公司)处理2h(阻止细胞增殖);

2.使用双孔硅胶(Ibidi公司)插入到细胞进行细胞单层的划痕处理;

3.使用InCellis来记录细胞迁移的图像,在不同的时间点(0、4、8、24、28、32、48h)对每个样品进行拍照定量分析;

4.对于每个图像,使用InCellis的软件测量功能,对伤口的两侧进行距离的测定,沿着伤口进行10次记录,细胞的平均迁移速度通过计算随时间的推移,距离与时间的比值来获得。

5.使用InCellis也可以在划痕实验中对图像进行融合度的分析。


实验结果



如图1所示,MCF-7、MDA-MB-231和Glypho-iBPCTC三种细胞进行了划痕实验,左边结果为0、8、32h捕获的图像;右边结果为三种细胞的迁移速率(μm/h);结果表明使用草甘膦诱导的乳腺肿瘤细胞的迁移速率最低。



图2所示为Glypho-iBPCTC细胞在划痕实验之后的成像图片,其中可以使用InCellis的细胞融合度计算功能,对细胞迁移的细胞计算融合度。




实验结论


细胞划痕实验结果表明使用草甘膦诱导的乳腺肿瘤细胞比MCF-7、MDA-MB-231这两种细胞系的迁移速率低,InCellis细胞智能成像系统可以轻松记录细胞迁移,同时也可以在几分钟内完成细胞融合度的计算。



使用InCellis,无需标记,无需侵入性的处理,直接可以直接在工作台上进行图像分析,是监测原代细胞培养理想的工具。



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