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高通量自动化pH定量新方案
来源: Admin    更新时间: 2019-08-08    浏览: 92 人次

基础科研和高通量药物筛选常用检测体系优化,pH值是其中一个至关重要的影响因素。常见的生物酶活性,蛋白结构,结合动力学等生化分子反应均受反应体系的pH值影响。因此,pH的精确测定对于体系优化等日常实验尤为重要。然而,常用的传统电极测定法,因其操作过程繁琐(包括校正,冲洗,测定,冲洗等),大大限制了高通量样品pH测定过程。


对此,德国BMG公司利用其专利的超快速全光谱检测酶标仪(SPECTROstar Nano)和美国Hudson Robotics Inc公司全自动移液工作站(SOLO自动移液器,Micro 10X分液器以及PlateCrane EX Robotic Arm高通量机械臂)开发出高通量自动化pH检测方案(图1)。

 图1,高通量自动化pH精准定量解决方案


该方案利用pH指示剂溴百里香酚蓝在不同酸碱环境下有不同吸收光谱这一特性进行精确定量。溴百里香酚蓝有两种存在形式:基础形式在620nm附近有最大吸收峰,中性形式在400-430nm有最大吸收峰。以往的方案中,利用基础形式的溴百里香酚蓝测定pH的比较常见。然而这种检测单一最大吸收波峰的方案,非常容易受溶液各种因素的影响,任何微小体积变化,溶液成份变化,都会影响最大吸收波长测定结果。本次介绍的新方案利用中性形式的溴百里香酚蓝,通过测定其在不同pH溶液中的吸收光谱信息(图2),快速准确测定溶液pH值(图3)。


图2,不同pH溶液中溴百里香酚蓝吸收光谱


图3,不同pH溶液,pH测定标准曲线。横坐标为不同溶液的pH值,纵坐标为溴百里香酚蓝吸收光谱范围内最大值减去背景值。数据资料显示,通过该方案测定的pH值,比测定基础形式的溴百里香酚蓝单一最大吸收波长更准确跟稳定。


这种新的pH定量方案,不仅检测数据精确稳定,同时结合自动化的Hudson Robotic整体液体处理方案及BMG SPECTROstarNano超超快速免选波长的检测方案,为小体积高通量pH精准定量提供了最理想的实验方案。


参考资料

https://www.bmglabtech.com/a-ph-determination-method-suitable-for-high-throughput-approaches-based-on-spectral-absorbance/




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